RICERCA ITALIANA     

Approcci integrati di 'gene-targeting' condizionale ed 'Archaea-express' per la modificazione in vivo di RNA

Abstract

Lo scopo del presente progetto e' l'integrazione del sistema Archaea-express con i metodi di 'gene-targeting' condizionale, al fine di ottenere la ricombinazione mirata e regolata di RNA messaggeri (mRNA) in ceppi di topo, modelli sperimentali di patologie umane. Il successo di questo progetto avra' un'importanza cruciale per la manipolazione razionale dei processi biologici in cellule e tessuti di mammifero, sia per quanto riguarda la modificazione pre-determinata e la creazione ex-novo di reti di trasduzione e processamento dei segnali cellulari, sia per l'applicazione, nel campo della terapia molecolare, alla creazione e correzione in vivo di mutazioni che modellino patologie umane.

La tRNA endonucleasi dell'archobatterio Methanococcus jannaschij (MJ endonucleasi) puo' riconoscere e tagliare specificamente strutture tipo 'bulge-helix-bulge (BHB)' presenti in RNA substrato. I prodotti della reazione di taglio sono successivamente ligati da una RNA-ligasi endogena. E' stato di recente dimostrato (Deidda, Rossi and Tocchini-Valentini, 2003), esprimendo la MJ endonucleasi in cellulle e tessuti di topo, che queste attivita' enzimatiche possono funzionare anche in cellule e tessuti di organismi superiori. Il sistema Archaea-express permette quindi la modificazione mirata di mRNA in cellule di mammifero, mediante espressione transgenica della MJ endonucleasi in grado di produrre la ricombinazione degli RNA substrato. Questo approccio e' stato originariamente>>>

Coordinatore Scientifico del Programma di Ricerca

Glauco Pasquale TOCCHINI-VALENTINI, CNR

Obiettivo del Finanziamento

Lo scopo principale del presente progetto e' l'integrazione del sistema Archaea-express con i metodi di 'gene-targeting' condizionale, al fine di ottenere la ricombinazione mirata e regolata di RNA messaggeri (mRNA) in ceppi di topo, modelli sperimentali di patologie umane.

Il sistema Archaea-express si basa sulla specifica capacita' della tRNA endonucleasi dell'archobatterio Methanococcus jannaschij (MJ endonucleasi) di riconoscere e tagliare specificamente strutture tipo 'bulge-helix-bulge (BHB)' presenti in RNA substrato. I prodotti della reazione di taglio sono successivamente ligati da una RNA-ligasi endogena. E' stato di recente dimostrato (Deidda, Rossi and Tocchini-Valentini, 2003), esprimendo la MJ endonucleasi in cellulle e tessuti di topo, che queste attivita' enzimatiche possono funzionare anche in cellule e tessuti di organismi superiori. Il sistema Archaea-express permette quindi la ricombinazione mirata di mRNA in cellule di mammifero, mediante espressione transgenica della MJ endonucleasi in grado di produrre la modificazione strutturale degli RNA substrato. Questo approccio e' stato sviluppato originalmente dal gruppo di G. Tocchini-Valentini presso CNR-IBC a Monterotondo (Roma), il partner italiano del presente progetto (Deidda, Rossi and Tocchini-Valentini, 2003).
Il presente progetto ha quindi come fine lo sviluppo di nuovi sistemi in vivo che permettano la ricombinazione mirata di mRNA, da parte della MJ endonucleasi in modo>>>

Durata

42 mesi