RICERCA ITALIANA     

IDENTIFICAZIONE DI NUOVI TARGET DI TERAPIE ANTINEOPLASTICHE ATTRAVERSO LO STUDIO DI PROTEINE SEGNALE CELLULARI E VIRALI E STUDIO DI INIBITORI SPECIFICI

Università degli Studi di Verona

Abstract

Scopo principale di questo programma di ricerca è quello di identificare nuovi "target" molecolari per terapie antineoplastiche attraverso lo studio di pathways di trasformazione neoplastica controllati da proteine cellulari e virali. L'attività di ricerca viene condotta da cinque unità che costituiscono due gruppi di ricerca interdipendenti: il primo centrato sullo studio dei meccanismi di azione di proteine cellulari (unità II, III, IV) e il secondo su proteine codificate da virus oncogeni (unità I, V).
L'unità IV (Comoglio) si propone di studiare eventi che portano al processo di crescita invasiva delle cellule epiteliali, indotto dai recettori tirosina chinasi codificati dai geni MET e RON e attivati da ligandi specifici quali HGF e Semaforine. L'identificazione di geni/proteine coinvolti nel controllo della crescita invasiva e della metastasi permetterà di utilizzarli come "target" per interventi terapeutici. L'attività di ricerca dell'unità IV ha come obiettivi prioritari quelli di caratterizzare la risposta trascrizionale delle cellule epiteliali a HGF e Semaforine e messa a punto di screening funzionali di geni coinvolti nella metastasi. Saranno utilizzati approcci di espressione di cDNA full length basati su microarrays di cellule transfettate, iniezione in topi immunocompromessi di cellule tumorali transfettate, trasduzione di geni candidati e misura delle loro proprietà invasive, piattaforma bioinformatica per l'analisi dei dati ed annotazione funzionale dei geni.
L'unità III (Parodi) si propone di sviluppare ulteriormente una ricerca che continua ormai da molti anni, di inibitori delle proteine segnale c-Myc e Bcl-XL in grado di interferire con la neo-omeostasi della cellula tumorale. L'attività di ricerca dell'unità III è puntata sulla ricerca di inibitori di c-Myc usando molecole peptidomimetiche, sull'individuazione di regioni di interazione proteina-proteina per studi di modeling molecolare guida alla progettazione di nuove molecole, sulla determinazione di eventuali antigenicità delle molecole peptidomimetiche e sulla messa a punto di composti di interesse terapeutico.
Il progetto di ricerca dell'unità II (Vecchio) è centrato sullo studio della patogenesi molecolare delle neoplasie tiroidee e sull'identificazione di strategie terapeutiche in grado di bloccare le chinasi RET e BRAF, due proteine chiave nella patogenesi della maggior parte dei carcinomi tiroidei umani(drug-like molecules ed anticorpi monoclonali). L'attività di ricerca dell'unità II ha come principali obiettivi lo studio di nuovi composti capaci di inibire l'oncogene RET e di superare i fenomeni di resistenza analizzandone gli effetti su linee tumorali umane, la caratterizzazione di nuovi anticorpi monoclonali in grado di inibire cellule esprimenti mutanti oncogenici di RET e l'analisi degli effetti di un nuovo inibitore della chinasi BRAF su carcinomi indifferenziati.
Le ricerche proposte dall'unità V (Ciminale) sono mirate a definire i meccanismi d'azione della proteina p13 del retrovirus umano HTLV-I nel contesto dell'infezione e delle patologie ad esso collegate. In particolare saranno analizzati gli effetti di p13 sulla permeabilità mitocondriale, sulla produzione di specie attive dell'ossigeno e sui meccanismi molecolari alla base di tali effetti; saranno inoltre analizzati gli effetti di p13 sull'espressione di geni cellulari, sulla propagazione virale e sulla trasformazione neoplastica.
L'unità I (Bertazzoni) rivolge la propria ricerca allo studio dell'infezione da HTLV-II, e alla comprensione della funzione dell'oncoproteina Tax. In paricolare saranno analizzati l'espressione e la localizzazione di Tax-II e saranno sviluppati approccci mirati ad ottenere il silenziamento di questa proteina e ad analizzarne gli effetti sulla propagazione di HLV-II e sulla patogenesi ad esso associata. <<<

Coordinatore Scientifico del Programma di Ricerca

Umberto BERTAZZONI Università degli Studi di VERONA

Obiettivo del Programma di Ricerca

Scopo principale di questi progetti è quello di identificare "target" molecolari per farmaci antineoplastici attraverso lo studio di geni e proteine cellulari e virali coinvolti nella patogenesi molecolare di diversi processi neoplastici. L'attività di ricerca è condotta da cinque unità indicate con numeri romani in relazione alla data di chiusura. Queste unità costituiscono due gruppi di lavoro interdipendenti: le unità II (Vecchio), III (Parodi) e IV (Comoglio) hanno scelto come bersaglio delle proteine cellulari che svolgono ruoli nodali in processi di trasformazione neoplastica e le unità I (Bertazzoni) e V (Ciminale) concentrano i loro sforzi su proteine trasformanti di retrovirus umani che causano malattie linfoproliferative.
Il gruppo di lavoro su "target" cellulari per farmaci antineoplastici è costituito dalle unità II, III, IV e si propone i seguenti obiettivi: a) Identificare i geni coinvolti nell'invasione tumorale che possono diventare target per l'intervento terapeutico; b) Mettere a punto degli inibitori delle proteine segnale c-Myc e Bcl-XL, che giocano ruoli importanti nel sostenere la malignità di molti tipi di cellule tumorali; c) Identificare strategie terapeutiche in grado di bloccare le chinasi RET e BRAF nei tumori tiroidei. L'Unità IV (Comoglio) si propone di studiare gli eventi che portano al processo di crescita invasiva delle cellule epiteliali, indotto dai recettori tirosina-chinasi codificati dai geni MET e RON, a loro volta attivati da ligandi specifici quali hepatocyte growth factor (HGF) e Semaforine. Gli obiettivi prioritari sono i seguenti: a) caratterizzazione della risposta trascrizionale delle cellule epiteliali a HGF e Semaforine e messa a punto di procedure di screening funzionale; b) identificazione e caratterizzazione di geni coinvolti nella crescita invasiva e che contribuiscono direttamente al fenotipo invasivo-metastatico delle cellule neoplastiche. Questo studio permetterà di ottenere una migliore comprensione dei meccanismi molecolari che controllano la crescita invasiva dei tumori e alla messa a punto di un pannello di potenziali marker diagnostici e target farmacologici. Scopo principale della ricerche proposte dall'Unità III (Parodi) è trovare inibitori delle proteine segnale c-Myc e Bcl-X in grado di interferire con la neo-omeostasi della cellula tumorale. L'attività è così programmata: a) Ricerca di inibitori di c-Myc usando molecole peptidomimetiche più estese nello spazio delle tipiche "drug-like molecules" e resistenti alle peptidasi; b) Sviluppo di metodi di screening in vitro per determinare gli effetti inibitori e stabilire la selettività della loro attività biologica; c) Individuare, a livello dell'interazione dell'eterodimero Myc/Max con proteine dell'higher order structure che lo circonda, regioni di interazione proteina-proteina sulle quali fare studi di modelling molecolare; d)Migliorare potenza e selettività dei leads già esistenti.
Il programma di ricerca dell'Unità II (Vecchio) è centrato sullo studio della patogenesi molecolare delle neoplasie tiroidee, sull'identificazione di strategie terapeutiche in grado di bloccare le chinasi RET e BRAF nei tumori tiroidei. Gli obiettivi principali sono i seguenti: a) Studio di nuovi composti capaci di inibire l'oncogene RET e di superare i fenomeni di resistenza analizzandone gli effetti su linee tumorali umane; b) Caratterizzazione di nuovi anticorpi monoclonali diretti contro il dominio extracellulare di RET e in grado di colpire cellule esprimenti mutanti oncogenici di RET; c) Analisi degli effetti di un nuovo inibitore delle chinasi BRAF su linee positive per mutazioni di BRAF di carcinomi indifferenziati.
Il gruppo di lavoro costituito dalle Unità I (Bertazzoni) e V (Ciminale) si propone di identificare possibili target terapeutici antineoplastici attraverso lo studio di proteine codificate da retrovirus oncogeni umani HTLV-I e HTLV-II. In particolare saranno analizzati i meccanismi con cui le proteine virali Tax e p13 controllano i pathways cellulari coinvolti nella trasformazione neoplastica. Le ricerche proposte dall'Unità V sono mirate a definire i meccanismi di azione della proteina p13 di HTLV-I nel contesto dell'infezione e delle patologie ad esso collegate. Obiettivi di ricerca proposti: a) Analisi degli effetti di p13 sulle funzioni mitocondriali; b) Analisi dei partner molecolari e dell'attività "canale" di p13 nel contesto dei mitocondri.; c) Analisi degli effetti di p13 sul pattern di espressione di geni cellulari; d) Effetti di p13 sulla propagazione virale e sulla trasformazione neoplastica. Le attività di ricerca dell'Unità I sono rivolte allo studio dell'infezione da HTLV-II e a mettere a punto sistemi di silenziamento genico. Si propongono inoltre di studiare funzione e struttura dell'oncoproteina Tax di HTLV-II. Il progetto prevede le seguenti linee di ricerca: a) Individuazione di target antivirali mediante tecniche di silenziamento genico; b) Analisi dell'espressione di Tax-II per comprenderne i meccanismi di regolazione e di trasporto cellulare; c) Studio dell'interazione Tax-II/proteine cellulari responsabile di processi degenerativi. <<<

Durata

24 mesi

Base di partenza scientifica nazionale o internazionale

1)Gruppo di lavoro su "target" cellulari per farmaci antineoplastici .
L'attività di ricerca proposta da questo gruppo, costituito dalle Unità II, III, IV è centrato sullo studio di proteine bersaglio che svolgono ruoli determinanti a livello della rete di segnali che controllano la proliferazione cellulare, l'apoptosi e il posizionamento tissutale.
L'Unità IV (Comoglio) si propone di identificare i geni coinvolti nella crescita invasiva dei tumori. La disseminazione metastatica è dovuta all'alterazione di geni che controllano la motilità, la crescita e la sopravvivenza cellulare. La somma di questi eventi porta alla cosiddetta crescita invasiva (1). Nelle cellule epiteliali questo processo è indotto specificamente dai recettori tirosina-chinasi codificati dai geni MET e RON, in seguito all'attivazione da parte dei loro ligandi specifici appartenenti alla famiglia degli scatter factors (HGF e MSP, rispettivamente). L'attivazione aberrante del programma di crescita invasiva nelle cellule cancerose conferisce proprietà invasive e metastatiche (2). Per esempio, l'attivazione oncogenica tramite overespressione o mutazione puntiforme del recettore MET è coinvolta nella progressione dei tumori epiteliali verso il fenotipo invasivo-metastatico (3, 4). Il completamento della crescita invasiva in risposta all'HGF richiede diversi giorni e coinvolge molto probabilmente la regolazione trascrizionale di geni bersaglio specifici. Infatti, in seguito a stimolazione con HGF, la tirosina chinasi MET regola contemporaneamente multiple vie di trasduzione del segnale (5, 6), le quali a loro volta controllano lo stato trascrizionale della cellula (7). Recentemente l'unità Comoglio ha dimostrato che la crescita invasiva nelle cellule epiteliali può anche essere indotta da una famiglia diversa di ligandi, le Semaforine, in seguito ad attivazione dei loro recettori appartenenti alla famiglia delle Plexine (8). In seguito ad attivazione ligando-dipendente, le Plexine interagiscono ed attivano i recettori per gli scatter factor (9). Si è anche dimostrato che l'attivazione di MET indotta dalle Plexine è indispensabile per la promozione della crescita invasiva (10). L'identificazione dei geni bersaglio di HGF e delle Semaforine, nonchè la loro sistematica caratterizzazione funzionale, permetterà una miglior comprensione dei meccanismi molecolari che controllano la crescita invasiva dei tumori, e genererà un pannello di potenziali markers diagnostici e target farmacologici.
Lo studio dell'unità III (Parodi) si colloca in una vasta area di strategie e tentativi di inibizione delle interazioni proteina-proteina. Lo scopo della ricerca proposta è quello di trovare inibitori di due proteine segnale potenzialmente importanti nel mantenere la malignità in cellule cancerose: c-Myc e Bcl-XL. Rilevanti indici terapeutici sono stati raggiunti, non soltanto in modelli sperimentali ma anche in specifici tumori umani, da recenti inibitori di alcune proteine segnale, specialmente della classe delle tirosino-chinasi. Una sovra-espressione patologica di c-Myc può promuovere la trasformazione neoplastica e inibire la differenziazione cellulare. Recentemente è stata dimostrata una attività cooperativa tra c-Myc e Bcl-XL (11). Lo studio riguarda la ricerca di inibitori di interazioni proteina-proteina a livello della "higher order structure" che sta attorno a c-Myc (12). La prova di principio di una possibilità di interferenza inibitoria a questo livello è stata ottenuta con successo usando molecole peptidomimetiche di circa 5 KDa che mimano la regione H1 di c-Myc L'identificazione di target biochimici addizionali nel transactivation domain (TAD) di c-Myc potrebbe infatti permettere un attacco sinergico a due differenti regioni della proteina, aumentandone la selettività e l'efficacia. Si tratta di un'innovazione concettuale importante.
Attraverso un meccanismo di evoluzione regressiva una cellula maligna acquisisce una nuova omeostasi. Una migliore comprensione della rete di segnali intorno a c-Myc ed ad altre regioni della rete rilevanti per la trasformazione neoplastica, potrà aumentare la probabilità di trovare nuovi inibitori di importanti proteine-segnale target. Una forte cooperazione nelle trasformazioni maligne, fra c-Myc e Bcl-XL, è stata riportata recentemente in modelli di topi transgenici.I membri della famiglia di Bcl2/Bcl-XL sono caratterizzati dalla presenza di 1-4 domini omologhi denominati "Bcl-2 homology domains" (BH). In diverse condizioni di differenziamento, proteine anti-apoptotiche come Bcl-XL, Bcl-2, Bcl-w, A1, Mcl-1, Boo/Diva, NR-13, possono sequestrare proteine pro-apoptotiche come Bak o Bax (13). Eccesso di espressione di Bcl-XL è stato osservato in molti tumori umani e in linee cellulari resistenti all'apoptosi indotta da agenti chemioterapici citotossici (14). Anche per questo target si cercheranno diversi tipi di molecole peptidomimetiche potenzialmente inibitrici,la cui struttura è ispirata da considerazioni strutturali e di modeling. In cellule tumorali, dove Bcl-XL è sovraespresso, le molecole di interferenza possono accecare o saturare Bcl-XL permettendo il rilascio di proteine proapoptotiche come Bak, Bax o Bim.
L'attività di ricerca dell'Unità II (Vecchio) riguarda lo studio dei tumori tiroidei che sono le più frequenti neoplasie del sistema endocrino. I tumori pailliferi (PTC) che derivano dalle cellule follicolari tiroidee rappresetnao il principale istotipo di neoplasia tiroidea. Dalle cellule C o parafollicolari della tiroide derivano, invece, i carcinomi midollari (MTC). I PTC sono neoplasie indolenti e ben curabili, ma esistono casi che rispondono male alla terapia con radioiodio. Gli MTC sono neoplasie molto aggressive e difficilmente curabili (15). La conoscenza della patogenesi molecolare delle neoplasie tiroidee ha fatto notevoli progressi. Sorprendentemente, un unico gene, chiamato RET, è coinvolto nella patogenesi sia dei PTC che degli MTC. Un'altra chinasi, BRAF, è mutata in PTC ed anche in carcinomi poco-differenziati della tiroide. L'obiettivo di questo programma di ricerca è di identificare strategie terapeutiche in grado di bloccare le chinasi RET e BRAF nei tumori tiroidei. Il gene RET codifica per un recettore di membrana con attività tirosino-chinasi (RTK). Come molte altre RTK, RET ha potenziale oncogeno (16). In circa il 40% dei PTC si trovano riarrangiamenti somatici di RET, determinati da traslocazioni oppure inversioni cromosomiche. Tali riarrangiamenti causano la fusione del dominio TK di RET a geni eterologhi, generando gli oncogeni chimerici RET/PTC. La fusione del TK di RET a domini proteici in grado di mediare interazioni proteina-proteina causa dimerizzazione costitutiva ed attivazione cronica dell'attivita' chinasica. La capacita' di trasformare tireociti in coltura e quella di indurre carcinomi papilliferi in topi transgenici prova il ruolo causale che svolgono i geni RET/PTC nell'insorgenza del carcinoma tiroideo (17, 18). Gli MTC insorgono frequentemente nell'ambito delle sindromi neoplastiche familiari autosomiche dominanti MEN2. Il gene BRAF appartiene alla famiglia delle serino-treonino chinasi RAF. Le proteine RAF sono coinvolte nella trasduzione dei segnali lungo la cascata RAS-RAF-MAPK. Sono attivate da RAS nella sua forma GTP e una volta attivate fosforilano ed attivano MEK, l'attivatore di MAPK. Mutazioni puntiformi in BRAF sono la lesione genetica piu' frequente identificata in PTC (19). In analogia a quanto dimostrato nel melanoma, in carcinomi ovarici e del colon, la mutazione V600E rappresenta circa il 90% delle mutazioni presenti nei PTC (20). Gli inibitori delle oncoproteine con funzione chinasica rappresentano un'importante classe di agenti terapeutici anti-neoplastici. Sebbene nella maggior parte dei casi queste molecole siano inibitori competitivi dell'ATP, è possibile ottenere inibitori selettivi con buona specificità e bassa tossicità. Il paradigma di queste nuove terapie e' rappresentato dall'Imatinib che ha profondamente cambiato l'approccio clinico alla leucemia mieloide cronica (CML). L'Imatinib e' un potente e selettivo inibitore di Bcr-Abl (21) e mostra efficacia anche contro i recettori TK, Kit e PDGFR. Kit e' importante nella patogenesi dei GIST (i tumori stromali gastrointestinali) e recettori della famiglia del PDGFR sono coinvolti nei GIST e nella patogenesi del dermatofibrosarcoma protuberans. Quindi, l'inibizione di Kit e PDGFR da parte di Imatinib rappresenta un potenziale approccio terapeutico anche per GIST e dermatofibrosarcoma (22). IL Gefitinib, inibitore di basso peso molecolare del EGFR, ha dimostrato efficacia nei confronti di carcinomi polmonari positivi per mutazioni attivanti del EGFR (23, 24. E' stata documentata resistenza sia primaria che acquisita all'Imatinib in pazienti affetti da CML. La resistenza e' comunemente dovuta allo sviluppo di mutazioni che introducono sostituzioni amminoacidiche nel dominio TK di Bcr-Abl. L'intervento di resistenza agli inibitori di chinasi e la refrattarieta' di alcuni tumori indica che c'è bisogno ancora di studi approfonditi prima che questi composti entrino a pieno diritto nella pratica clinica. La specificita' degli anticorpi monoclonali e' stata da tempo sfruttata per bersagliare cellule tumorali. Oggi, i primi anticorpi monoclonali per uso oncologico stanno trovando applicazione clinica. Essi possono bloccare recettori di membrana e reclutare funzioni effettrici dell'ospite come la citotossicita' dipendente dagli anticorpi o la citotossicita' dipendente dal complemento, oppure, infine, possono veicolare molecole citotossiche.
2)Gruppo di lavoro su meccanismi di trasformazione controllati da proteine virali.
Questo gruppo di lavoro, costituito dalle Unità I (Bertazzoni) e V (Ciminale), si propone di identificare possibili target terapeutici contro i retrovirus oncogeni umani HTLV-I e HTLV-II e studiare gli effetti delle proteine Tax di HTLV-II e p13II di HTLV-I sulla trasformazione neoplastica. I retrovirus oncogeni "Human T-cell lymphotropic viruses" di tipo I (HTLV-I) e di tipo II (HTLV-II) presentano una struttura genomica complessa e sono stati associati a malattie linfoproliferative ed infiammatorie croniche (25-31). Sebbene HTLV-I e HTLV-II siano molto vicini dal punto di vista strutturale e genomico, differiscono sensibilmente per quanto riguarda la patogenicità e il tropismo cellulare. HTLV-I è stato riconosciuto come l'agente eziologico della leucemia a cellule T dell'adulto (ATL) ed è anche associato ad una forma di mielopatia nota come paraparesi spastica tropicale (HAM/TSP) (32, 33). In vivo, l'HTLV-I presenta un tropismo preferenziale per I linfociti T CD4+ mentre l'HTLV-II ha un tropismo preferenziale per le CD8+ (34, 35). I trattamenti terapeutici tradizionali messi in atto contro le differenti forme di leucemia ATL e della HAM/TSP, non hanno per ora dato risultati soddisfacenti (29). L' infezione da HTLV-1 interessa all'incirca 20 milioni di individui, concentrati in diverse aree geografiche (ad es. Giappone, Caraibi, Africa centrale) (36). Il genoma di HTLV-1 contiene diverse "open reading frames" (ORF) oltre ai geni gag, pol ed env presenti in altri retrovirus. Queste ORF aggiuntive codificano per un attivatore trascrizionale (Tax), un regolatore post-trascrizionale (Rex) e tre proteine "accessorie" la cui funzione e' tuttora oggetto di studio (37). I nostri studi hanno evidenziato che p13II, una proteina accessoria di HTLV-1, si localizza nella membrana interna mitocondriale (38, 39). Successivi studi di mappaggio funzionale hanno dimostrato che p13II contiene una sequenza segnale di localizzazione mitocondriale (MTS) compresa fra gli amino acidi 21-30. Studi di predizione di struttura ed analisi mediante dicroismo circolare hanno poi dimostrato che la regione MTS assume una conformazione ad alfa elica anfipatica nel contesto di membrane fosfolipidiche (38, 39, 40). La proteina p13II inoltre e' in grado di alterare la struttura dei mitocondri che acquisiscono un aspetto frammentato ed apparentemente rigonfiato (38). Tali dati sono sostenuti da studi in vitro su mitocondri isolati che hanno dimostrato che peptidi sintetici che comprendono la regione 9-41 della proteina sono in grado di indurre alterazioni della permeabilita' mitocondriale al K+ (39). Studi mirati a definire l'impatto di p13II sulla crescita cellulare hanno dimostrato che questa proteina esercita effetti oncosoppressori, rallenta la proliferazione cellulare ad alta densita' ed aumenta la sensibilita' all'apoptosi indotta da ceramide (41). Le ricerche proposte dall'unità V (Ciminale) sono mirate a definire i meccanismi di azione di p13II il suo significato funzionale nel contesto dell'infezione da HTLV-1 e delle patologie ad essa associate. In particolare si intende utilizzare p13II come modello per studiare il ruolo delle funzioni mitocondriali nello sviluppo. E' interessante notare che diversi virus oncogeni esprimono proteine mitocondriali in grado di modificare la permeabilita' di questi organelli o direttamente o attraverso interazione con proteine canale codificate da geni cellulari. (42).
L'attività di ricerca dell'Unità I (Bertazzoni) è puntata sullo studio dell'infezione da HTLV-II, per il quale non è stata ancora riscontrata una relazione precisa tra infezione e forme patogene e non sono stati messi a punto dei protocolli terapeutici efficaci. In Italia l'infezione da HTLV-II si ritrova in circa il 5-10% dei casi di tossicodipendenti (injecting drug users, IDU) coinfettati da HIV-1 (45- 48). Queste coorti sono particolarmente importanti essendo tra le più studiate in Europa e nel mondo. L'infezione da HTLV induce gravi disfunzioni del sistema immunitario, tra cui la proliferazione spontanea dei linfociti T, di cui si ritiene sia il principale responsabile la proteina trans-regolatoria Tax, codificata dal gene virale tax (51). Infatti, oltre a promuovere la trascrizione dell'RNA virale, Tax è in grado di transattivare i promotori di geni eucariotici eterologhi coinvolti nell'attivazione e proliferazione dei linfociti T. Evidenze sperimentali dimostrano, infatti, che Tax I si associa direttamente a diversi fattori chiave del ciclo cellulare (53 -54). Molto meno note sono le interazioni cellulari della proteina Tax di HTLV-II (Tax- II) (55). Recentemente l'unità di ricerca I ha contribuito a dimostrare che il transattivatore di classe II del MHC, CIITA, è in grado di inibire in modo determinante la replicazione virale di HTLV-II e che questo effetto è dovuto all'inibizione specifica della transattivazione delle LTR di HTLV-II da parte di Tax (56). Questa diversità nella attività patogenetica rende lo studio strutturale e funzionale di Tax II molto promettente per la comprensione dei meccanismi cellulari che più specificamente intervengono nella oncogenesi. Studi molto recenti del gruppo di W. Hall, mirati a comprendere le proprietà oncogeniche di Tax-I e Tax-II e basati sull'inserimento dei rispettivi geni in topi trasgenici sotto il controllo del promotore Ick, hanno permesso di stabilire che questi topi sviluppano, in seguito alla modificazione subita, una serie di gravi patologie che comprendono linfoadenopatia, epatomegalia, splenomegalia e tumori mesenterici (57). Le interazioni cellulari prevalentemente nucleari di Tax II presuppongono un suo attivo trasporto nel nucleo nel corso dell'infezione e l'interazione con recettori citoplasmatici di trasporto non ancora identificati. Questo progetto si propone di studiare la regolazione dell'espressione funzionale della proteina Tax-II derivata dal suo trasferimento nel nucleo delle cellule infettate e del suo silenziamento mediante tecnologia di interference RNA. <<<