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INIZIO_TESTO_DA_INDICIZZARE

PROGRAMMA DI RICERCA 2004

italiano - english
Programmi di ricerca simili:
Classificazione scientifico-disciplinare
Classificazione brevettuale
  • CHEMISTRY; METALLURGY
    • BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
      • MICRO-ORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF (biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, containing micro-organisms, viruses, microbial fungi, enzymes, fermentates or substances produced by or extracted from micro-organisms or animal material A01N63/00; food compositions A21, A23; medicinal preparations A61K; chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings, absorbent pads or surgical articles A61L; fertilisers C05); PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICRO-ORGANISMS (preservation of living parts of humans or animals A01N1/02); MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA (micro-biological testing media C12Q)
Classificazione geografica
Bibliografia
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Parole Chiave
GENOMICA; PROTEOMICA; ANALOGHI DELLA SOMATOSTATINA; RAS; MICROSCOPIA FLIM; PROTEINE REGOLATRICI DEL CICLO CELLULARE; INIBITORI DELLE FARNESIL TRANSFERASI; COMPARTIMENTALIZZAZIONE INTRACELLULARE; APOPTOSI

STUDIO CON APPROCCI DI GENOMICA E PROTEOMICA DELL'ESPRESSIONE, DELL'ATTIVITA' E COMPARTIMENTALIZZAZIONE INTRACELLULARE DI PROTEINE COINVOLTE NEL SIGNALLING IN CELLULE TUMORALI UMANE ESPOSTE O NON AD AGENTI BIOLOGICI E CITOTOSSICI.

Seconda Università degli Studi di Napoli
Abstract
La terapia medica tradizionale delle neoplasie è attualmente affidata all'impiego di agenti citotossici convenzionali il cui meccanismo d'azione principale è il danno irreversibile e letale al DNA delle cellule tumorali. Accanto al danno al DNA, uno dei meccanismi d'azione della chemioterapia tradizionale è l'induzione di apoptosi nelle cellule neoplastiche. Tuttavia le cellule tumorali possono sviluppare dei meccanismi di fuga dall'apoptosi coinvolgenti le alterazioni dei circuiti regolativi della trasmissione del segnale mitogenico e del ciclo cellulare che assicurano alle cellule neoplastiche la sopravvivenza nell'ospite e la protezione dall'apoptosi. Inoltre appare sempre più emergente la necessità di scoprire nuove molecole in grado di inibire la proliferazione cellulare tumorale e dotate di attività antitumorali in vivo. Accanto a questa esigenza sta anche emergendo la necessità di caratterizzare gli effetti di farmaci dotati d attività antitumorale sull'espressione genica e sul profileo proteico delle cellule tumorali. Il progetto intende pertanto individuare nuove molecole antitumorali e definirne il meccanismo d'azione attraverso lo studio dell'espressione genica e proteomica e degli effetti sulla trasduzione del segnale.

Coordinatore Scientifico del Programma di Ricerca
Ettore BISMUTO Seconda Università degli Studi di NAPOLI
Obiettivo del Programma di Ricerca
Il lavoro della Unità di Ricerca del Prof. Bismuto si articolerà lungo due direttive: la prima utilizzante come principale tecnica di indagine la microscopia FLIM e volta alla localizzazione intracellulare di costrutti fluorescenti di ras con FGP (Fluorescent Green Protein) in cellule normali e tumorali con e senza trattamento con opportune molecole che siano potenziali farmaci; la seconda volta alla caratterizzazione strutturale e funzionale in vitro dei costrutti fluorescenti di ras e dei suoi complessi con altre proteine cellulari coinvolte nella cascata di traduzione. Tali studi si avvarranno in particolare di tecniche di fluorescenza risolte nel tempo e della spettroscopia di correlazione di fluorescenza con eccitazione a due fotoni che consente di osservare interazioni e processi dinamici e diffusivi al livello di molecole singole.

Il progetto di ricerca del prof. Beninati, ha come obiettivo principale l'approfondimento dei fenomeno tramite il quale è possibile controllare la crescita tumorale, agendo indirettamente sul metabolismo delle poliammine, per mezzo cioè del differenziamento cellulare indotto dall'aumentata attività Tgasica. In particolare, la novità nell'approccio sperimentale deriva dal fatto che, non sarà valutato il banale effetto citostatico di farmaci capaci di impedire la crescita cellulare in modo aspecifico, ma si cercherà di stabilire le potenzialità di un trattamento il cui fine è quello di impedire in modo selettivo la crescita >>>

Risultati parziali attesi
Bismuto
- Trasformazione con costrutti di FGP, crescita ed osservazioni microscopiche FLIM con cellule normali e tumorali in
assenza o dopo trattamento con opportune con potenziale interesse farmacologico: mesi 5
- Caratterizzazione dell' espressione proteica di cellule normali e cancerogene nei vari trattamenti con farmaci: mesi 5
- Trasformazione in Escherichia coli di costrutti di FGP, crescita, estrazione e purificazione: mesi 2
- Beninati
- 1. Sintesi e determinazione degli effetti di attivatori della Tgasi intracellulare (Tg-attivatori). Questa parte del programma si svolgerà in collaborazione con il laboratorio del Dr. J.E. Folk, National Institutes of Health, Oral and Pharingeal Cancer Branch, NIDR, Bethesda, MD, USA. Le procedure di sintesi si baseranno su protocolli propri del Dr. Folk. In particolare, si partirà da analoghi delle metilxantine e dell'acido retinoico. Sarà valutato il grado di attivazione della Tgasi in vitro e in vivo, discriminando tra attivazione della proteina e sua espressione genica. Determinazione delle variazioni indotte dai Tg-attivatori nei parametri connessi con la crescita, il differenziamento e la morte cellulare (espressione dell'antioncogene p53, dell'oncogene c-myc e bcl-2, e analisi del ciclo cellulare con la citofluorimetria in fluorescenza). Studio dell'azione dei Tg-attivatori su cellule normali (colture primarie di melanociti) e neoplastiche (linee cellulari di melanoma murino ed >>>

Durata
24 mesi
Base di partenza scientifica nazionale o internazionale
Sin dagli studi pionieristici su retrovirus trasformanti cellule di topo fino alla corrente era postgenomica, lo studio delle proteine ras è considerato fondamentale per la comprensione dei fenomeni di trasduzione dei segnali cellulari e dell'oncologia molecolare (1,2). Tutt'ora una completa comprensione della funzione delle proteine della famiglia ras e delle patologie ad esse riconducibili, in primo luogo il cancro umano, non è stata raggiunta (3). La conoscenza di tali meccanismi cellulari è essenziale per lo sviluppo di farmaci efficaci per il trattamento di numerosi tipi di tumori (4).
Le proteine ras sono membri di una grande superfamiglia di proteine leganti GTP a basso peso molecolare (5). In vitro le proteine ras purificate posseggono un basso livello di attività GTP-asica per la quale convertono lentamente la molecola di GTP che ad esse è legata. Il GDP può poi essere scambiato nuovamente con GTP. Comunque, questi processi sono catalizzati e regolati all'interno della cellula con vari tipi di proteine effettrici (guanine nucleotide exchange factors GEFs e GTPases activating proteins GAPs). Le proteine della famiglia ras controllano i processi di crescita cellulare e svolgono un ruolo nei processi di apoptosi e senescenza (6, 7). Esse si ritrovano in forme mutate sia attivate sia inibite in diversi tumori umani. Le proteine ras richiedono per il loro normale funzionamento modifiche post-traduzionali il cui scopo principale è la loro localizzazione nel giusto >>>