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PROGRAMMA DI RICERCA 2004

italiano - english
Unità di Ricerca
Programmi di ricerca simili:
Classificazione scientifico-disciplinare
Classificazione brevettuale
Classificazione geografica
Bibliografia
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Parole Chiave
CELLULE STAMINALI; TRAUMA MIDOLLARE; STUDIO SPERIMENTALE; OSSIDO NITRICO

LESIONI TRAUMATICHE DEL MIDOLLO SPINALE NEL RATTO E SUCCESSIVO IMPIANTO DI CELLULE STAMINALI IN SEDE DI LESIONE

Seconda Università degli Studi di Napoli
Abstract
L'utilizzo di cellule staminali per rimpiazzare le cellule lese nelle aree danneggiate del sistema nervoso è una possibilità eccitante, ma lo sviluppo di tali progenitori come potenziali agenti terapeutici è frenato dalla conoscenza ancora incompleta della loro biologia. Il concetto di ripristinare la funzionalità lesa in seguito ad una lesione traumatica mediante il trapianto di precursori staminali nel midollo spinale è innovativo e solo recentemente acquisito. Tenteremo in questo studio di dimostrarne, in accordo con le recenti indicazioni della letteratura internazionale, l'efficacia.
In una prima fase si utilizzeranno 16 ratti Sprag-Dawley, stabulati in condizioni ambientali standard sottoposti ad anestesia per via intraperitoneale con una soluzione di pentobarbital al 6%. La dose somministrata sarà di 1 ml di soluzione/kg di peso. Si esporrà una porzione sufficiente dell'astuccio durale integro per eseguire le diverse procedure traumatiche sperimentali:il primo modello è compressivo lesionale mediante l'applicazione di un peso di 20gr per la durata di 5 minuti. Il secondo modello è compressivo con clip da aneurisma, in un gruppo di 4 animali si applicherà clip retta per aneurisma (Heyfetz) sull'astuccio durale esposto per un minuto. Il terzo modello è contusivo di lesione, in un ulteriore gruppo di 4 animali, l'astuccio durale esposto sarà sottoposto a contusione mediante l'applicazione di un pistone di 20gr ,disposto all'interno di una guida cilindrica con >>>

Coordinatore Scientifico del Programma di Ricerca
Antonio Fernando CIOFFI Seconda Università degli Studi di NAPOLI
Obiettivo del Programma di Ricerca
Scopo di questa ricerca è, nella prima fase, l'identificazione di un ideale modello di trauma vertebro-midollare del ratto e nella seconda fase, ottenere cellule staminali dal midollo osseo del ratto ed impiantarle nell'area lesa.
L'utilizzo di cellule staminali per rimpiazzare le cellule lese nelle aree di danneggiate del sistema nervoso è una possibilità eccitante, ma lo sviluppo di tali progenitori come potenziali agenti terapeutici è frenato dalla conoscenza ancora incompleta della loro biologia. Il concetto di ripristinare la funzionalità lesa in seguito ad una lesione traumatica mediante il trapianto di precursori staminali nel midollo spinale è innovativo e solo recentemente acquisito. Tenteremo in questo studio di dimostrarne, in accordo con le recenti indicazioni della letteratura internazionale, l'efficacia.
In una prima fase si utilizzeranno 16 ratti Sprag-Dawley, stabulati in condizioni ambientali standard sottoposti ad anestesia per via intraperitoneale con una soluzione di pentobarbital al 6%. La dose somministrata sarà di 1 ml di soluzione/kg di peso. Si esporrà una porzione sufficiente dell'astuccio durale integro per eseguire le diverse procedure traumatiche sperimentali, auspicando di dimostrare la validità del primo modello compressivo lesionale mediante l'applicazione di un peso di 20gr per la durata di 5 minuti.
Durante il follow-up postoperatorio tutti gli animali verrano sottoposti , secondo un preciso calendario, a 7 prove >>>

Risultati parziali attesi
La maggior parte delle lesioni midollari nell'uomo sono causate da un danno di tipo compressivo. Pertanto un tale modello di lesione è da auspicare per il nostro progetto di ricerca: molti autori hanno studiato il danno midollare in ratti Sprague-Dawley mediante l'utilizzo di una compressione esercitata dall'applicazione di un peso sul midollo stesso per un tempo determinato
Il fine di questa prima fase del programma di ricerca sarà la valutazione delle conseguenze dannose della contusione e della compressione di breve e lunga durata sul midollo spinale del ratto.
Si procederà ad una valutazione di tipo funzionale attraverso un follow-up postoperatorio in cui tutti gli animali verrano sottoposti , secondo un preciso calendario, a 7 prove comportamentali ,ispirate da quelle eseguite da K. Gale presso la Georgetown University School of Medicine, Washington D.C. Per superare il problema della soggettività nella valutazione del comportamento animale, l'assegnazione dei valori verrà affidata a tre osservatori indipendenti .
Prove comportamentali:
Test 1: deficit locomotori
Test 2: distensione delle dita
Test 3: riflessi di raccoglimento dell'arto in seguito ad estensione meccanica
Test 4: riflessi di raccoglimento dell'arto in seguito a dolore
Test 5: capacità di raddrizzarsi una volta appoggiato sulla schiena
Test 6: valutazione delle capacità natatorie
Test 7: test tail flick
I dati comportamentali >>>

Durata
12 mesi
Base di partenza scientifica nazionale o internazionale
La maggior parte delle lesioni midollari nell'uomo sono causate da un danno di tipo compressivo.
Questo ci fa capire l'importanza di un tale modello di lesione anche nel nostro progetto di ricerca:
molti autori hanno studiato il danno midollare in ratti Sprague-Dawley mediante l'utilizzo di una compressione esercitata dall'applicazione di un peso sul midollo stesso per un tempo determinato. (1, 2)
Tra i modelli sperimentali proposti in letteratura il sistema sviluppato per il Multicenter Animal Spinal Cord Injury Study (MASCIS) prevede l'asportazione microchirurgica dell'arco posteriore di T8 con la conseguente esposizione dell'astuccio durale, una volta esposto l'astuccio durale si utilizza un meccanismo standardizzato di danno midollare nel ratto. Questo prevede la caduta di un peso che può andare dai 10g ai 30g da un'altezza variabile a seconda dell'entità del danno che vogliamo indurre da 1,25 a 10 cm.(3, 4, 5)
Altri hanno utilizzato, per lo studio delle variazioni ioniche dopo trauma spinale, un modello di danno midollare MASCIS con l'utilizzo di quattro gruppi di ratti nei quali un peso di 10g veniva lasciato cadere da una altezza rispettivamente di 1.25 cm, 2.5 cm, 5 cm e 7.5 cm sul tratto toracico del midollo dopo laminectomia (5).
Shibuya per lo studio dell'espressione della nestina in seguito a trauma midollare ha studiato un modello compressivo con l'applicazione di un peso di 30 g per un tempo di 10 minuti in seguito a >>>