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INIZIO_TESTO_DA_INDICIZZARE

PROGRAMMA DI RICERCA 2005

italiano - english
Unità di Ricerca
Programmi di ricerca simili:
Classificazione scientifico-disciplinare
Classificazione brevettuale
  • CHEMISTRY; METALLURGY
    • BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
      • MICRO-ORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF (biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, containing micro-organisms, viruses, microbial fungi, enzymes, fermentates or substances produced by or extracted from micro-organisms or animal material A01N63/00; food compositions A21, A23; medicinal preparations A61K; chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings, absorbent pads or surgical articles A61L; fertilisers C05); PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICRO-ORGANISMS (preservation of living parts of humans or animals A01N1/02); MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA (micro-biological testing media C12Q)
Classificazione geografica
Bibliografia
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Parole Chiave
VIRUS DI EPSTEIN-BARR; LINFOMAGENESI; LATENZA; REPLICAZIONE; TELOMERASI; CICLO CELLULARE; APOPTOSI

INTERAZIONE TRA VIRUS DI EPSTEIN-BARR E CELLULA OSPITE

Università degli Studi di Roma "La Sapienza"
Abstract
Il virus di Epstein-Barr (EBV) è un γ-herpesvirus ubiquitario umano capace di trasformare linfociti B in vitro, ed è associato con numerose neoplasie B linfocitarie in vivo. Nel presente progetto di ricerca, ci proponiamo di investigare alcuni aspetti delle due fasi della infezione da EBV: a) il ciclo produttivo, che si verifica durante la replicazione virale, con l'espressione sequenziale di geni precoci e tardivi, e b) il ciclo latente, in cui il virus stimola la proliferazione cellulare attraverso l'espressione di un numero limitato di geni virali latenti. Per quanto riguarda l'infezione litica, abbiamo recentemente identificato e caratterizzato due proteine virali, BFRF1 e BFLF2, che sono espresse precocemente durante la replicazione virale, ed abbiamo dimostrato che BFRF1 è essenziale per l'acquisizione dell'envelope e per l'uscita del virus dalla cellula. Per investigare ulteriormente la maturazione intracellulare del virus, costruiremo un ceppo mutante di EBV privo di BFLF2, per analizzare il ruolo funzionale di questa seconda proteina virale, e verificheremo le potenziali interazioni del complesso BFRF1-BFLF2 con ulteriori proteine virali e/o cellulari nel contesto delle fasi finali della replicazione.
Relativamente alla fase latente dell'infezione, direttamente correlata alle proprietà trasformanti del virus, ci proponiamo di studiare la regolazione molecolare della latenza virale in cellule appartenenti a vari stadi del differenziamento linfocitario B >>>

Coordinatore Scientifico del Programma di Ricerca
Alberto FAGGIONI Università degli Studi di ROMA "La Sapienza"
Obiettivo del Programma di Ricerca
Gli obiettivi del presente progetto sono i seguenti:

U.O. n. 1 (Faggioni):

- infettare con EBV ricombinante una serie di linee cellulari apparenenti a diverse fasi differenziative di linfomi di tipo B ed analizzarne le modificazioni geniche e fenotipiche indotte, nonchè il tipo di latenza virale espressa.
- analizzare la capacità oncogena delle linee convertite in vitro, rispetto a quella delle loro controparti EBV negative, mediante saggi in vitro (clonabilità in agarosio) ed in vivo (inoculazione in topi SCID).
- ottenere transfettanti stabili con singoli geni virali (LMP-1, LMP2A, EBNA-1 e EBERs) delle suddette linee EBV negative per identificare il gene/i responsabile delle eventuali modificazioni e del possibile aumentato potenziale oncogeno
- analizzare l'espressione di fattori di trascrizione chiave per il differenziamento plasmacellulare (bcl-6, pax-5, oct-2, blimp-1 e xbp-1) nelle suddette linee EBV negative e positive. Poiché è possibile che l'assenza di espressione di alcuni geni virali latenti (EBNA 2-6), osservata precedentemente in alcuni dei suddetti tumori (PELs) in seguito ad infezione con EBV ricombinante, sia dovuta ad una down-regolazione di tali fattori di trascrizione, intendiamo ricostituire il macchinario dei fattori di trascrizione mancante mediante espressione ectopica, allo scopo di verificare se il loro ripristino possa permettere l'espressione di tutte le proteine virali latenti.
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Durata
24 mesi
Base di partenza scientifica nazionale o internazionale
Il virus di Epstein-Barr (EBV) è il virus più dotato di attività trasformante fra tutti quelli noti, e la sua associazione con neoplasie umane è di gran lunga superiore a quella di tutti gli altri virus. EBV è soprattutto associato con il linfoma di Burkitt (BL), con il carcinoma nasofaringeo (NPC) e con il linfoma di Hodgkin (HD)(Rickinson e Kieff, 1996). Il virus provoca anche malattie linfoproliferative che insorgono in pazienti immunodepressi, e si riscontra frequentemente nei linfomi diffusi a grandi cellule (DLCL) e nei linfomi delle effusioni primarie (PEL) tipici in pazienti con AIDS.
In seguito alla infezione primaria, EBV mima una reazione del centro germinativo per penetrare all'interno del compartimento dei linfociti B con memoria. Questo effetto è mediato da due proteine latenti del virus, LMP1 e LMP2A. Mentre LMP-1 agisce come un CD40 costitutivamente attivo, LMP2A rappresenta un equivalente funzionale del BCR. Il virus permane nei linfociti B con memoria e sfugge al controllo immunitario dell'ospite perché i linfociti B con memoria sono "resting", perdurano a lungo e si dividono raramente. Dopo l'ingresso in tali linfociti, il virus spegne l'espressione di tutte le proteine latenti ed esprime EBNA-1 solo quando la cellula B con memoria va incontro a divisione mitotica (Babcock et al, 1998). Nelle linee cellulari linfoblastoidi (LCL), che si ottengono mediante infezione in vitro del linfocita B, EBV esprime tutti i nove geni della latenza, EBNA1-6, LMP1 >>>