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INIZIO_TESTO_DA_INDICIZZARE

PROGRAMMA DI RICERCA 2005

italiano - english
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Classificazione geografica
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Parole Chiave
TROMBINA; FATTORI DI CRESCITA; ANGIOGENESI; PERMEABILITÀ VASALE; MORBO DI ALZHEIMER

EFFETTI NON EMOSTATICI DELLA TROMBINA: INTERAZIONE CON FATTORI DI CRESCITA, E SUO RUOLO NELLA PROLIFERAZIONE CELLULARE, IN PROCESSI NEURODEGENERATIVI E IN CONDIZONI DI ALTERATA PERMEABILITA' VASALE

Università Cattolica del Sacro Cuore
Abstract
Il progetto si propone di studiare il ruolo non emostatico svolto dalla trombina in processi di attivazione endoteliale, angiogenetici, di aumentata permeabilità vasale e in fenomeni patologici neurodegenerativi, in particolare nel Morbo di Alzheimer.
Gli obiettivi specifici del presente studio saranno:
1) studio sugli effetti angiogenici e proliferativi della trombina su linee cellulari in coltura (cellule endoteliali [HUVEC] e
cellule di melanoma) in presenza ed assenza sia dei fattori di crescita che della trombina stessa;
2) identificazione di nuovi substrati della trombina fra i fattori di crescita più comuni: FGF-2, PDGF-BB, VEGF, e NGF, per mezzo di
tecniche di western-blot e HPLC;
3) studio sull'effetto proteolitico della trombina su FGF-2, PDGF-BB, PDGF-AA e NGF per determinare i parametri cinetici di
stato-stazionario relativi alla loro idrolisi. I siti potenziali di proteolisi saranno identificati mediante analisi della sequenza N-terminale e mediante spettrometria di massa;
4) sviluppo di modelli molecolari di interazioni fra trombina e FGF-2, mediante approcci computazionali di modelling molecolare;
5) sintesi di peptidi, che, sulla base dei risultati delle simulazioni di molecular modeling, possono inibire l'interazione
trombina-FGF-2. Il legame di questi peptidi (oltre FGF-2, da cui i peptidi sono derivati) con la trombina sarebbe allora studiato
tramite la tecnica della "surface >>>

Coordinatore Scientifico del Programma di Ricerca
Raffaele LANDOLFI Università Cattolica del Sacro Cuore
Obiettivo del Programma di Ricerca
I risultati che lo studio presente si prefigge di ottenere possono offrire nuove chiavi di comprensione degli effetti non emostatici della trombina in vivo. Particolare interesse sarà rivolto agli effetti trombinici sulla proliferazione cellulare, l'angiogenesi, al controllo della permeabilità vasale, ed all'interazione con proteine coinvolte nella patogenesi di patologie neurodegenerative come il morbo di Alzheimer. Osservazioni cliniche molto comuni indicano che la trombina è coinvolta in funzioni cellulari quali l'angiogenesi e la proliferazione. Per esempio, si osserva comunemente che dopo trombosi di una grande vena, l'embolo si ricanalizza con nuovi vasi evidenziabili angiograficamente. Inoltre è riconosciuto che mentre la trombina nel plasma è inattivata velocemente dall'antitrombina, le molecole dell'enzima bloccate all'interno dei trombi sono protette e lentamente vengono rilasciate durante la trombolisi. Questa trombina bloccata fungerebbe da fattore di controllo angiogenetico di concerto con i fattori di crescita, tramite la chemiotassi di cellule endoteliali, mediando il loro fenotipo angiogenico. Inoltre, è riconosciuto il fatto che la trombina interagisce con vari costituenti della matrice endoteliale (ECM). La trombina immobilizzata su ECM è protetta dall'inattivazione dei suoi inibitori circolanti ed induce molte risposte cellulari.
Il legame della trombina all'ECM subendoteliale, mediante un corto sito di ancoraggio, lascia la maggior parte della >>>

Durata
24 mesi
Base di partenza scientifica nazionale o internazionale
EFFETTI CELLULARI INDOTTI DALLA TROMBINA: CELLULE ENDOTELIALI.
A lungo riconosciuta per il suo ruolo nella cascata coagulativa, la trombina è ora riconosciuta regolare le sue cellule bersaglio,
quali le piastrine e le cellule endoteliali, in parte tramite l'attivazione di recettori correlati a G-Proteins (GPCR) (1-3). Il nuovo meccanismo tramite il quale la trombina attiva i relativi recettori coinvolge lo smascheramento di una sequenza criptica NH2-terminale del recettore che, rimanendo ancorata, si lega al recettore stesso e ne innesca la funzione (1). Inoltre, piccoli peptidi sintetici (5 - 6 amino acidi), basati sulla sequenza smascherata dalla proteolisi, possono attivare il recettore della trombina senza smascherare il ligando ancorato al recettore stesso (1). Dalla clonazione del primo recettore della trombina (ora chiamato
"recettore-1 proteasi-attivato", o PAR-1), sono stati clonati due nuovi membri della famiglia clivati dalla trombina (PAR-3 e -4)
(4-6), insieme ad un PAR aggiuntivo attivato dalla tripsina, ma non dalla trombina (ora chiamato PAR-2) (7). Le caratteristiche
chiave di distinzione della famiglia dei PAR sono 1) la loro sensibilità selettiva alle proteasi a serina (per esempio, PAR-1 e -4
possono essere attivati sia da trombina che da tripsina, mentre PAR-2 è attivato da tripsina e da altre proteasi a serina, ma non dalla trombina); e 2) le loro sequenze d'attivazione distinte [TRAP] (per esempio, SFFLRN >>>