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PROGRAMMA DI RICERCA 2006

italiano - english
Unità di Ricerca
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Classificazione brevettuale
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Bibliografia
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Parole Chiave
SALIVA, SECREZIONE SALIVARE, GHIANDOLE SALIVARI, ULTRASTRUTTURA, FARMACI SECRETAGOGHI, PEPTIDI SALIVARI, PEROSSIDASI SALIVARE, ATTIVITÀ ANTIPATOGENI

Studio morfofunzionale, biochimico e microbiologico sulla saliva e le ghiandole salivari

Università degli Studi di Cagliari
Abstract
Allo scopo di completare i dati ottenuti in precedenza sui campioni di ghiandola sottomandibolare stimolata in vitro e sul suo secreto l'unità l estenderà l' indagine alla parotide e valuterà gli effetti della fenilefrina agente farmacologico attivo sui recettori adrenergici alfa 1A e alfa2B e del A61603 agonista selettivo degli alfa 1. Inoltre, poichè è noto che esiste una secrezione (cosiddetta non-adrenergica-non colinergica)non sensibile ai trasmettitori classici studierà l’effetto dell’atropina (bloccante pan muscarinico). In alcuni esperimenti il farmaco verrà impiegato da solo. In altri il trattamento con atropina precederà o seguirà quello con i secretagoghi stimolanti i recettori muscarinici specifici. Analoghi esperimenti verranno condotti, in un secondo tempo, utilizzando gli inibitori specici per i recettori beta- (propanololo) e alfa- (fentolamina; 5-metylurapidil) adrenergici. In collaborazione colla unità 2 si studieranno, prima e dopo i trattamenti farmacologici, la localizzazione immunocitocimica ultrastrutturale dei peptidi salivari nelle substrutture dei granuli di secreto. Colla unità 3 si dimostrerà, nelle cellule ghiandolari, e nelle varie condizioni sperimentale la distribuzione ultrastrutturale della perossidasi salivare. Verranno anche studiati, in TEM e MES , gli effetti dei peptidi salivari isolati dalla unità 2 sulla morfolologia di culture di Candida albicans e di altri agenti patogeni attivi nella cavità orale fornite dalla unità 4. I >>>

Coordinatore Scientifico del Programma di Ricerca
Alessandro Riva Università degli Studi di CAGLIARI
Obiettivo del Programma di Ricerca
Questo studio, morfofunzionale- biochimico- microbiologico, integrato tra le quatro unità proponenti, si propone di chiarire ulteriormente il meccanismo della secrezione salivare sia valutando a livello cellulare, con metodi morfometrici, l'azione di agenti secretagoghi, sia determinando qualitativamente e quantitativamente il contenuto e le proprietà dei peptidi e delle piccole proteine specifici della saliva prodotta dalle varie ghiandole salivari. Ciò è reso possibile da una tecnica di stimolazione in vitro che prevede l’incubazione di campioni di materiale bioptico umano in un mezzo inorganico privo di aminoacidi (Riva et al 2003). I campioni, estratti dal bagno e pesati, verranno fissati e trattati per il MET e per il MES come indicato nel programma. L’analisi morfometrica verrà condotta su immagini in MES ad alta risoluzione con una tecnica realizzata dal’Unità 1. I peptidi e le piccole proteine salivari verranno determinati nel bagno, al termine dell'incubazione, con le strategie HPLC-ESI-Ion Trap-tandem-MS e tramite elettroforesi 2-D seguita da analisi MALDI-TOF messe a punto (Castagnola et al., 2001; Lupi et al., 2003) dalle Unità 2 e 4. L'indagine delle componenti proteiche sarà focalizzata in particolare su peptidi e proteine appartenenti alle classi delle istatine, delle PRP acide e basiche, delle defensine, delle cistatine e sulla staterina. Si procederà anche all’analisi di saliva prelevata con metodi non invasivi da mammiferi e da soggetti >>>

Durata
24 mesi
Base di partenza scientifica nazionale o internazionale
Allo scopo di studiare la dinamica della secrezione salivare abbiamo sviluppato un metodo di incubazione in vitro di biopsie chirurgiche (Riva et al 2002; 2003; Testa Riva et al. 2006) che oltre a permettere alla nostra unità la valutazione morfometrica degli effetti indotti dall’ impiego di farmaci secretagoghi, consente, alle unità 2-3–4 cui viene trasmesso il liquido di incubazione, di definire, nelle diverse condizioni di stimolazione, i caratteri biochimici e le eventuali proprietà antibatteriche ed antivirali dei prodotti di secrezione. Grazie al nostro metodo di macerazione osmica (Riva et al., 1999) abbiamo osservato al MES, a livello 3D, sia nelle salivari maggiori (Segawa et al., 1998; Riva et al., 2003) che in quelle minori (Riva et al., 2002) le modificazioni indotte dai secretagoghi sui tratti di plasmalemma interessati dal fenomeno secretorio. Più recentemente (Testa Riva et al., 2006), al fine di quantificare la risposta dei campioni alla stimolazione, abbiamo calcolato con metodi statistici, sulle immagini di HRSEM, il n° dei microvilli e quello delle microvescicole (considerate come espressione morfologica del riciclo della membrana dei granuli escreti) per µm2 di plasmalemma. Oltre al carbacolo e all’isoproterenolo agenti, rispettivamente, pan- muscarinico e beta adrenergico e la cevimelina (SNI-2011) attiva sui recettori muscarinici M3, è stata usata la clozapina, un derivato della dibenzodiazepina, usato nel trattamento di alcune psicosi, che provoca >>>