RICERCA ITALIANA     

Programma di ricerca

Basi genetiche e neurali della risposta antidepressiva

Università di riferimento

Università degli Studi di BARI - SCIENZE NEUROLOGICHE E PSICHIATRICHE - BARI(BA)

Responsabile dell'Unità di ricerca

Alessandro BERTOLINO

Descrizione

Il presente studio si propone di: a) Replicare l'effetto del polimorfismo del SERT sull'attività dell'amigdala (aumentata attivazione associata col genotipo s in soggetti sani) – fase 1 ; b) Valutare il potenziale effetto della terapia antidepressiva con Sertralina sull'attività dell'amigdala in soggetti con DDM in relazione al polimorfismo genetico del SERT –fase 2.

Metodi

Soggetti

FASE 1:
Nei primi 6 mesi saranno reclutati almeno 40 soggetti sani, di età compresa tra i 18 ed i 45 anni. I criteri di inclusione saranno: assenza di malattia psichiatrica (Asse I-II, DSM-IV), di malattia organica cerebrale, di pregressi traumi cranici con perdita di coscienza, di malattia neurologica, di ritardo mentale o di qualunque altra malattia diagnosticabile. Le donne incluse nello studio non dovranno essere gravide né nel periodo del puerperio. E' richiesto inoltre un punteggio all'Hamilton Depression Rating Scale (HAM-D-21) inferiore a 8.

FASE 2:
Nei successivi 18 mesi saranno reclutati 24 pazienti con DDM. I criteri di inclusione per i pazienti saranno: età tra i 18 e 45 anni, assenza di malattia psichiatrica concomitante (Asse I-II, DSM-IV), di malattia organica cerebrale, di pregressi traumi cranici con perdita di coscienza, di malattia neurologica, di ritardo mentale o di qualunque altra malattia diagnosticabile. Le donne incluse nello studio non dovranno essere gravide né nel periodo del puerperio. E' richiesto inoltre un punteggio all'Hamilton Depression Rating Scale (HAM-D-21) di almeno 18.
La diagnosi di DDM sarà effettuata attraverso l'intervista clinica strutturata secondo il DSM IV (SCID- DSM IV). I pazienti potranno essere inclusi nello studio solo se la durata della malattia non è superiore a 24 mesi e non hanno assunto terapia da almeno due settimane. I pazienti con ideazione o comportamento suicidario saranno esclusi.
In questa fase i dati saranno collezionati anche da un gruppo di 24 controlli sani comparabili con i pazienti per età, sesso, IQ, livello socio-economico, etnia. I criteri di inclusione per i controlli sani saranno gli stessi di quelli utilizzati nella fase 1.

Il protocollo sarà sottoposto all'approvazione del Comitato Etico locale. Ad ogni soggetto sarà richiesta la sottoscrizione di un consenso informato dopo la spiegazione delle procedure previste dallo studio.


Procedure

FASE 1:
Una volta che i soggetti sani avranno acconsentito a partecipare allo studio verranno programmati gli appuntamenti (a) per la raccolta dei dati di interesse e per la somministrazione delle scale di valutazione, (b) per l'effettuazione del prelievo ematico ai fini dell'analisi genetica e (c) per l'esame di risonanza magnetica dell'encefalo.

a) L'intervista clinica diagnostica (SCID) durerà tra i 30 e 90 minuti a seconda delle necessità. La sintomatologia depressiva sarà valutata con la Hamilton Depression Rating Scale (HAM-D-21) per la Depressione. Sarà inoltre effettuata una valutazione clinica generale per escludere la presenza di una eventuale condizione medica generale. Saranno inoltre valutate una serie di altre variabili demografiche: QI (WAIS-R), manualità, scolarità e livello socioeconomico di appartenenza.
b) A tutti i partecipanti allo studio saranno prelevati 30 ml di sangue intero in vacutainer contenenti EDTA per la successiva estrazione di DNA genomico dai linfociti, utilizzando una tecnica di precipitazione ad alta concentrazione salina. Il DNA andrà a costituire una banca per le successive analisi molecolari. I geni prescelti saranno analizzati mediante tecniche di biologia molecolare. Le analisi molecolari si baseranno principalmente su tecniche di PCR. La genotipizazzione degli SNPs sara' eseguita utilizzando RFLP(Restriction Fragment analysis Polymorphisms).
c) Risonanza Magnetica Funzionale:
Compito neuropsicologico: Il paradigma sperimentale che verrà utilizzato durante l'esame di fMRI sarà costituito dall'alternarsi di 5 blocchi di immagini[43]: due blocchi con stimoli emotigeni intervallati da tre blocchi con stimoli emotivamente neutri. Ciascun blocco avrà la durata di 33 secondi (durata totale del compito: 2min 45sec). Durante la presentazione dei blocchi con stimoli emotivi, apparirà per sei volte un trio di immagini di facce (sei trii differenti). Le facce, sia maschili che femminili, selezionate da un gruppo standard di espressioni facciali, presenteranno espressioni di rabbia e paura. Due delle tre facce presentate saranno identiche. Ai soggetti verrà chiesto di associare le facce uguali tra loro. Durante i blocchi con gli stimoli neutri appariranno tre forme geometriche (cerchi ed ellissi verticali o orizzontali) di cui due uguali tra loro. Il soggetto assocerà le figure tra loro uguali. Le performance ottenute al compito saranno registrate in termini di accuratezza (percentuale di risposte corrette) e tempo di reazione (millisecondi).
Acquisizione e processamento dei dati fMRI:
I soggetti sani saranno studiati con fMRI una sola volta. I dati di fMRI saranno acquisiti con un magnete GE 3 Tesla (sequenza gradient-echo EPI, TE= 30 ms, TR= 3000 ms, FOV = 24 mm, matrice = 64 x 64, flip angle = 90, voxel = 3.75, 3.75, 5 mm. 24 fette cerebrali, spessore = 4 mm, intervallo = 1mm). Per l'analisi utilizzeremo lo Statistical Parametric Mapping (SPM99). Verranno prima effettuate delle analisi di primo livello, per ottenere le mappe di attivazione cerebrale di ciascun soggetto durante l'esecuzione del compito neuropsicologico. Valuteremo specificatamente attraverso un t-test la differenza di segnale tra la fase del compito in cui avviene l'associazione dei volti, con la fase del compito in cui avviene l'associazione tra le forme geometriche. Utilizzando modelli ad effetti random saranno eseguite analisi di gruppo (t-test ed ANOVA) per la determinazione dell'impatto differenziale del polimorfismo per il trasportatore della serotonina sull'attività dell'amigdala.

FASE 2:
Per i controlli sani che acconsentiranno a partecipare allo studio saranno applicate le stesse procedure seguite nella fase 1.
Per i pazienti che avranno espresso il loro consenso alla partecipazione allo studio verranno programmati gli appuntamenti (a) per la raccolta dei dati di interesse clinico, per la somministrazione delle scale di valutazione e la pianificazione del trattamento farmacologico, (b) per l'effettuazione del prelievo ematico ai fini dell'analisi genetica e (c) per l'esame di risonanza magnetica dell'encefalo.

a) L'intervista clinica diagnostica (SCID) durerà tra i 30 e 90 minuti a seconda delle necessità. La sintomatologia depressiva sarà valutata con la Hamilton Depression Rating Scale (HAM-D-21) per la Depressione. La SF36 sarà utilizzata per la valutazione degli esiti del trattamento. Sarà inoltre effettuata una valutazione clinica generale per escludere la presenza di una eventuale condizione medica generale. Saranno inoltre valutate una serie di altre variabili demografiche: QI (WAIS-R), QI premorboso (tramite la versione italiana della WRAT), manualità, scolarità e livello socioeconomico di appartenenza.
I pazienti inclusi nello studio verranno trattati in monoterapia con Sertralina (100-200 mg/die) e saranno valutati con la HAM-D-21 prima dell'inizio del trattamento farmacologico, a 2 ed a 8 settimane. In caso di mancata risposta dopo 6 settimane (mancata riduzione del 50% del punteggio della HAM-D basale), il farmaco potrà essere modificato in base alla routine dell'Unità. Concomitanti terapie permesse saranno bassi dosaggi di Benzodiazepine (15-30 mg di Flurazepam od equivalenti nei primi 10 giorni di trattamento).
b) Prelievo ematico ai fini dell'analisi genetica: vedi fase 1.
c) Risonanza Magnetica Funzionale: Tutti i pazienti saranno studiati con fMRI due volte: dopo due e otto settimane di trattamento con Sertralina. I controlli sani saranno studiati una volta.
Compito neuropsicologico: vedi fase 1.
Acquisizione e processamento dei dati fMRI: vedi fase 1 per l'acquisizione dei dati ed il processamento di primo livello.
Per l'analisi di secondo livello sarà utilizzato un modello random effects per determinare le risposte regionali specifiche al compito a livello di gruppo (t-test). Sarà inoltre effettuata analisi della varianza per valutare sia l'attivazione differenziale dell'amigdala nei pazienti e nei controlli sani (between group analysis), sia l'effetto del trattamento con Sertralina (within group analysis).